Краткая методика на Глюкозу ФКД
КРАТКАЯ МЕТОДИКА по применению набора «ГЛЮКОЗА - ФКД»
Набор предназначен для количественного определения содержания глюкозы в крови и моче глюкозооксидазным методом и рассчитан на 100 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора на один анализ (или 50 определений при расходе 2,0 мл на анализ).
КОМПЛЕКТ НАБОРА:
1) ферментно-хромогенная смесь - 1 таблетка;
2) антикоагулянт (оксалат натрия, фторид натрия) - 1 таблетка
3) калибратор (раствор глюкозы с концентрацией 10 ммоль/л) - 1 флакон ;
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА:
Отклонение от линейности при концентрации глюкозы 2-20 ммоль/л не более 5%.
Чувствительность - не более 1 ммоль/л. Коэффициент вариации - не более 5%
НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ:
Спектрофотометр, фотоэлектроколориметр (кюветы с длиной оптического пути 5 или 10 мм), или биохимические анализаторы открытого типа.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего раствора.
Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц.
Приготовление раствора антикоагулянта.
Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА КРОВИ
Используется негемолизированная сыворотка или плазма крови человека.
Содержание билирубина до 324 мкмоль/л не влияет на правильность анализа.
Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.
При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:
Для кювет ® | с длиной оптического пути 10 мм | с длиной оптического пути 5 мм | ||||
Реагенты ¯ | Опытная | Калибр. проба, мл | Холостая | Опытная | Калибр. проба, мл | Холостая |
Рабочий раствор | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
Сыворотка крови | 0,02 | --- | --- | 0,04 | --- | --- |
Калибратор | --- | 0,02 | --- | --- | 0,04 | --- |
Вода дистиллиров. | --- | --- | 0,02 | --- | --- | 0,04 |
Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37°С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25°С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.
После окончания инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10 мм при длине волны 500 (490-540) нм.
Окраска проб стабильна более 4 ч после окончания инкубации.
Расчет концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:
С = ( ЕО / ЕК ) * 10,
где: С - концентрация глюкозы, ммоль/л;
ЕО - оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотн.;
ЕК - оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн.;
10 - концентрация глюкозы в калибраторе, ммоль/л.
При использовании биохимических анализаторов отношение сыворотки к раствору рабочего реагента должно составлять » 1 : 80, т.е. на 800 мкл рабочего раствора следует добавлять 10 мкл сыворотки крови.
Определение содержания глюкозы в плазме крови.
Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.
Для приготовления калибровочной пробы в пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.
Анализ проводить аналогично определению содержания глюкозы в сыворотке крови.
Для проведения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10 мм, и по 0,4 мл - для кюветы с длиной оптического пути 5 мм.
При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости.
При получении значения концентрации глюкозы выше 20 ммоль/л пробы разбавляют дистиллированной водой в 10 раз и повторяют анализ, при этом полученный результат следует умножить на коэффициент разведения 10.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ.
При проведении серийных анализов мочи проводится качественный скрининг. В лунки иммунологического планшета вносят 0,005 мл мочи и 0,2 мл рабочего реактива. Пробы мочи, вызывающие в течение 2 мин. покраснение реакционной смеси, считаются положительными. Для них должно быть проведено количественное определение содержание глюкозы.
Количественное определение проводят аналогично определению содержания глюкозы в сыворотке крови.
Нормы содержания глюкозы:
в сыворотке или плазме крови человека - 3,6-6,1 ммоль/л., в моче - не более 0,5 ммоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнять значения нормы для исследуемого контингента людей.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ.
Хранить набор при +2-8°С в темном месте в течение всего срока годности (1 год). Допускается хранение при температуре +18-25°С не более 20 дней.
Рабочий раствор хранить при +2-8°С в плотно укупоренном флаконе из темного стекла, используя в течение 7 дней. При расходе рабочего раствора менее 100 мл в неделю следует после растворения таблетки «ферменты-хромогены» разлить рабочий раствор в чистые плотно укупориваемые флаконы темного стекла дозами, необходимыми на неделю - это позволит использовать рабочий раствор в течение месяца. Появление слабой розовой окраски не влияет на результаты исследования при выполнении условий калибровки.
Раствор антикоагулянта можно хранить при +2-8°С в течение 30 дней.
Калибратор после вскрытия флакона рекомендуется хранить при +2-8°С в темном месте не более 3 месяцев.
С вопросами по методике и качеству наборов обращаться: 127434, г.Москва, Дмитровское шоссе, дом 11, офис 114, т/ф (499) 976-35-76 ООО «Фармацевтика и клиническая диагностика»